摘要：目的部分純化傘枝犁頭霉分泌的毒力因子，并研究其誘導人血管內(nèi)皮細胞凋亡的機制。方法用ConALectin親和層析法純化傘枝犁頭霉分泌的糖蛋白，并在流式細胞儀下檢測不同蛋白成分對人血管內(nèi)皮細胞凋亡的影響。用變性和非變性法去除傘枝犁頭霉糖蛋白的糖基，并分別檢測其蛋白和寡糖成分誘導凋亡的活性。Westernblot法分析傘枝犁頭霉糖蛋白誘導人血管內(nèi)皮細胞caspase激酶活化情況。用caspase抑制劑檢測caspase一8和-9在凋亡反應中的作用。XTT法檢測caspase抑制劑能否終止細胞存活率的抑制。結(jié)果流式細胞儀分析顯示傘枝犁頭霉分泌的總蛋白和糖蛋白能以劑量依賴的方式誘導人血管內(nèi)皮細胞凋亡，而非糖蛋白則無此活性。純化的去糖基化蛋白和寡糖成分都不能獨立誘導人血管內(nèi)皮細胞凋亡。在凋亡信號傳導途徑中，caspase-9、-3和細胞色素C顯著活化，而caspase-8未見活化。Caspase-9抑制劑能夠終止傘枝犁頭霉糖蛋白誘導的凋亡反應，而caspase－8抑制劑則無此效應。Caspase-9和-3抑制劑終止了人血管內(nèi)皮細胞活性下降。結(jié)論傘枝犁頭霉分泌的糖蛋白具有誘導人血管內(nèi)皮細胞凋亡的活性。糖蛋白結(jié)構(gòu)的完整性對其誘導凋亡的活性是必需的。內(nèi)源性凋亡信號傳導途徑介導了傘枝犁頭霉糖蛋白誘導的凋亡反應。