枇杷iPBS分子標(biāo)記的PCR體系優(yōu)化與引物篩選
作者：顧林平; 張冰; 費(fèi)艷; 王化坤; 王鵬凱 江蘇省蘇州市吳中區(qū)金庭鎮(zhèn)農(nóng)林服務(wù)站; 江蘇蘇州215119; 江蘇省太湖常綠果樹技術(shù)推廣中心; 江蘇蘇州215107; 江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺; 南京210014; 蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院; 江蘇蘇州215008
摘要：以枇杷的DNA為模板進(jìn)行iPBS-PCR擴(kuò)增,采用預(yù)備試驗(yàn)中效果較好的iPBS分子標(biāo)記引物2241,對枇杷iPBS-PCR反應(yīng)體系中的dNTP、Mg^2+、引物、模板用量進(jìn)行優(yōu)化。根據(jù)檢測結(jié)果確定枇杷iPBS-PCR使用10×Taq buffer 2μL,25mM Mg^2+1.6μL,2.5mM dNTP 1.6μL,10μmol/L Primer 1μL,5U/μL Taq酶0.2μL,模板DNA 5ng的20μL反應(yīng)體系。反應(yīng)程序中的退火溫度可以參考iPBS引物理論Tm值。對33條iPBS引物擴(kuò)增測試的結(jié)果顯示在該反應(yīng)體系下可以篩選到譜帶清晰、多態(tài)性好的引物22條,可用于枇杷的分子標(biāo)記分析。
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