摘要：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌Rv1787基因的原核表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行體外表達(dá),運(yùn)用生物學(xué)信息分析方法分析Rv1787基因編碼蛋白PPE25的生物學(xué)特征。 方法以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組DNA為模板,PCR法擴(kuò)增Rv1787基因,并與表達(dá)載體pET-32a構(gòu)建重組質(zhì)粒。原核表達(dá)重組質(zhì)粒,SDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物并利用親和層析的方法進(jìn)行純化。利用生物信息學(xué)軟件ProtParam分析PPE25蛋白的理化性質(zhì),TMPRED和SignalP4.1Service預(yù)測(cè)蛋白的跨膜區(qū)和信號(hào)肽,NPS@SOPMA和Swissmodel分別預(yù)測(cè)蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu),Bepipred 1.0bserver和DNAStar綜合預(yù)測(cè)蛋白的B細(xì)胞抗原表位,綜合運(yùn)用SYFPEITHI、BIMAS、NetCTL、RANKPEP、NetMHCⅡPAN 4.0server預(yù)測(cè)蛋白的CTL細(xì)胞表位,綜合運(yùn)用SYFPEITHI、RANKPEP、NetMHCⅡpan 3.2server預(yù)測(cè)蛋白的Th細(xì)胞表位。 結(jié)果pET-32a-Rv1787重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與目的基因完全一致;SDS-PAGE分析表明,該融合蛋白以包涵體形式存在,相對(duì)分子質(zhì)量為56×10^3,與預(yù)期大小相符。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,PPE25蛋白為疏水性蛋白,含多個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,無(wú)信號(hào)肽。二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲構(gòu)成,結(jié)構(gòu)比較松散。綜合多種表位預(yù)測(cè)軟件分析結(jié)果,篩選出3個(gè)優(yōu)勢(shì)B細(xì)胞抗原表位,7個(gè)CTL優(yōu)勢(shì)抗原表位和9個(gè)Th優(yōu)勢(shì)抗原表位。 結(jié)論成功構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌PPE25蛋白編碼基因Rv1787重組原核表達(dá)質(zhì)粒,并利用生物信息學(xué)篩選出多個(gè)優(yōu)勢(shì)抗原表位,為進(jìn)一步研究PPE25蛋白在結(jié)核病發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。