摘要：目的:構(gòu)建CD31啟動(dòng)子的綠色熒光蛋白和螢光素酶真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至內(nèi)皮細(xì)胞系HUVEC和BEND3細(xì)胞中,對其生物學(xué)功能和活性進(jìn)行初步檢測,作為鑒定內(nèi)皮細(xì)胞的新方法。方法:從基因組中釣取CD31啟動(dòng)子的核酸序列,將其插入pGL4.0螢光素酶載體和慢病毒表達(dá)載體pCDH-copGFP,經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和測序驗(yàn)證后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUVEC和BEND3內(nèi)皮細(xì)胞系及對照MCF7乳腺癌細(xì)胞,通過雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)檢測其啟動(dòng)子活性,熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)。結(jié)果:雙酶切與測序結(jié)果表明表達(dá)載體中正確插入了CD31啟動(dòng)子序列;雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)和熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)CD31啟動(dòng)子特異性在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)論:CD31啟動(dòng)子的螢光素酶和綠色熒光表達(dá)載體構(gòu)建成功,可作為鑒定內(nèi)皮細(xì)胞的新型技術(shù)手段。