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過表達(dá)漆酶基因Lelcc1的香菇菌株構(gòu)建及表型分析

作者:顏蓮蓮; 徐瑞平; 戴勝宏; 王剛正; 邊銀丙; 龔鈺華; 周雁 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院應(yīng)用真菌研究所; 湖北武漢430070

摘要:真菌漆酶(laccase)是一種多酚氧化酶,在真菌生長發(fā)育中具有重要作用。本研究采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的方法,以香菇Lentinulaedodes菌株W1為受體菌株,在Leactin基因啟動子調(diào)控下過表達(dá)Lelcc1基因;對其中7個(gè)單拷貝插入的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行qRT-PCR分析,7個(gè)Lelcc1基因表達(dá)量較出發(fā)菌株W1均上調(diào)了1.5–8倍。進(jìn)一步分析了這7個(gè)轉(zhuǎn)化子的遺傳穩(wěn)定性;挑取了3個(gè)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行表型分析,主要包括不同培養(yǎng)基中的生長速度、代料栽培過程中菌棒轉(zhuǎn)色程度、以及透射電鏡觀察菌絲細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子和受體菌株W1的生長速度無顯著差異,但代料栽培過程中轉(zhuǎn)化子較W1轉(zhuǎn)色更快,菌棒表面顏色更深;透射電鏡觀察菌絲細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞壁厚度、細(xì)胞膜形態(tài)等方面,其中兩個(gè)超量表達(dá)轉(zhuǎn)化子與W1間存在顯著差異。結(jié)果表明,香菇Lelcc1基因可能參與了轉(zhuǎn)色過程中色素合成或積累,也可能與細(xì)胞壁形成有關(guān)。

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